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显微镜观察用细胞样品如何保存

发布日期: 2017-10-18
浏览人气: 2641

       显微镜固定的具体方法可参考常电镜样品制备方法,徕卡显微镜免疫电镜和电镜细胞化学各章。显微镜所谓包裹(Encapsulation),显微镜就是利用某些大分子溶液浸透样品的过程.这些大分子不会穿过细胞膜而进入细胞,只能占据细胞间的空隙,显微镜包裹的目的也是为了防止超薄切片在制备过程中被破坏。这一步对于显微镜分散的细胞样品尤其必要。

如果徕卡显微镜样品是游离细胞,可按下述步骤包裹:

  1.将BSA加入一离心管内,显微镜浓度与上同;

  2.把经过固定的细胞转入离心管;

  3.在冷冻离心机上离心10分钟,800g, 40C;

  4.去掉上清,数码显微镜在管底沉淀上加一滴用0. lmol/L磷酸缓冲液配制的10%的戊二醛,使残余的BSA交连;

  5.用针把聚合后的团块拨起,切成小块。

  为防止显微镜冷冻时生成大的冰晶而使结构破坏,组织需经冷冻保护剂处理,常用的冷冻保护剂有甘油(30%), DMSO (20%)和蔗糖(2.3mol/L),均用缓冲液配制,显微镜组织在冷冻保护剂中浸泡的时间为0.5-1小时(室温)或过液((400)

  为防止大的冰晶产生,数码显微镜除使用冷冻保护剂外,应采取速冻的办法,其基本要求与具体作法和冷冻断裂与蚀刻时相同,即将经数码显微镜冷冻保护的组织块投入用液氮冷却的氛里昂12内.

       如果你的支架比较稳定,不会与各步骤中的试剂反应,然后你对于细胞的脱水变形也能接受,那就用常规的方法。

       如果你的支架不稳定,细胞干燥形变后,脱水过程会溶解或者反应。而且细胞变形也不太好看,建议你可以用冷冻扫描电镜。冷冻扫描电镜是解决这样的“困难样品”的*方法。样品直接冷冻到液氮泥里面,不经过其他脱水过程。*保持样品原始状态!

 

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